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第一篇 生物化学实验技术原理第一章 离心技术及原理2

1.1 离心基本原理2

1.2 离心机的结构与分类4

1.3 离心机的应用5

第二章 层析技术及原理9

2.1 层析概述9

2.2 常用层析技术11

第三章 电泳技术及原理22

3.1 电泳概述22

3.2 常用电泳技术25

第四章 光谱技术及原理32

4.1 分光光度法32

4.2 旋光分析法35

第五章 生物大分子的分离纯化39

5.1 分离纯化概述39

5.2 生物材料的选择和前处理40

5.3 常用生物大分子分离纯化技术42

5.4 样品的保存45

第二篇 生物化学模块实验第一模块 糖化学实验技术48

1.1 糖化学实验技术48

实验1 糖的还原作用48

实验2 糖的旋光性和变旋现象（糖含量测定）50

1.2 糖的含量测定51

实验1 血糖浓度的测定（邻甲苯胺法）51

实验2 蒽酮比色法测定植物组织中总糖含量53

实验3 3,5-二硝基水杨酸法测定总糖与还原糖含量55

第二模块 脂质化学实验技术58

2.1 脂肪提取及含量和性质测定58

实验1 脂肪酸价的测定58

实验2 油脂皂化值的测定59

实验3 粗脂肪提取与含量的测定（索氏抽提法）60

实验4 血清甘油三酯含量测定（乙酰丙酮显色法）62

2.2 血清胆固醇的定量测定64

实验1 磷硫铁法测定血清胆固醇含量64

实验2 邻苯二甲醛法测定血清胆固醇含量66

实验3 乙酸酐法测定血清胆固醇含量67

2.3 肝中丙二醛含量的测定68

第三模块 蛋白质化学实验技术71

3.1 蛋白质与氨基酸的性质实验71

实验1 蛋白质的颜色反应71

实验2 蛋白质的沉淀作用74

实验3 蛋白质的盐析和透析75

3.2 牛乳中酪蛋白的制备77

3.3 蛋白质和氨基酸的层析分离77

实验1 氨基酸纸层析77

实验2 氨基酸的薄层层析79

实验3 离子交换层析分离蛋白质80

实验4 凝胶过滤层析测定蛋白质的相对分子质量81

3.4 蛋白质和氨基酸含量测定83

实验1 植物组织中赖氨酸含量的测定83

实验2 考马斯亮蓝（G-250）比色法测定蛋白质含量84

实验3 Folin-酚法测定蛋白质含量86

实验4 紫外分光光度法测定蛋白质含量87

实验5 微量凯氏定氮法测定蛋白质含量88

3.5 蛋白质电泳分析91

实验1 乙酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白91

实验2 聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳分离血清蛋白质93

实验3 SDS-PAGE测定蛋白质的相对分子质量95

实验4 等电聚焦电泳法测定蛋白质的等电点98

实验5 SDS-PAGE检测植物中热激蛋白（银染法）100

第四模块 核酸化学实验技术104

4.1 核苷酸的分析测定104

实验1 纸电泳法测定腺苷三磷酸（ATP）含量104

实验2 薄层层析法分离核苷酸106

实验3 离子交换柱层析分离单核苷酸107

实验4 5′-核苷酸含量测定（过碘酸氧化法）108

4.2 核酸含量的测定110

实验1 定磷法测定核酸含量110

实验2 紫外分光光度法测定核酸含量112

4.3 核酸的提取及分析114

实验1 动物肝DNA的提取及含量测定（二苯胺法）114

实验2 酵母RNA的提取及组成成分鉴定117

实验3 动物肝组织中核酸的制备与测定118

第五模块 酶学及维生素实验技术122

5.1 酶的性质实验122

实验1 温度与pH对唾液淀粉酶活性的影响122

实验2 酶的专一性124

实验3 唾液淀粉酶的激活与抑制作用125

5.2 酶促反应动力学实验127

实验1 影响酶活力的因素——正交实验法128

实验2 胰蛋白酶米氏常数的测定131

实验3 过氧化氢酶米氏常数测定132

5.3 酶活力的测定134

实验1 淀粉酶的活力测定134

实验2 酸性磷酸酯酶活力测定137

实验3 胆碱酯酶活力测定140

实验4 肝丙氨酸氨基转移酶（ALT）活性测定141

实验5 血清氨基转移酶活性的测定——赖氏比色法143

实验6 超氧化物歧化酶（SOD）活力测定146

实验7 溶菌酶的分离纯化和活力测定149

5.4 同工酶分析150

实验1 琼脂糖凝胶电泳法分离LDH同工酶及血清LDH总活力的测定151

实验2 植物过氧化物酶同工酶测定（凝胶圆盘电泳）154

5.5 维生素的定量测定156

实验1 维生素B1的定量测定（荧光光度法）156

实验2 维生素B2的定量测定（荧光光度法）158

实验3 2,6-二氯酚靛酚法测定维生素C含量159

实验4 磷钼蓝法测定维生素C含量161

第六模块 物质代谢实验技术164

6.1 糖代谢实验164

实验1 肌糖原酵解作用164

实验2 胰岛素、肾上腺素对血糖浓度的影响166

实验3 发酵过程无机磷的利用168

6.2 脂质代谢实验169

实验1 油料种子脂肪转化为糖的定性实验169

实验2 脂肪酸β-氧化的测定170

第七模块 常见生物活性物质分离分析技术172

实验1 花色素的分离、纯化与测定172

实验2 熊果酸的制备和测定174

实验3 儿茶素的提取和测定175

实验4 血红素的提取和测定177

实验5 番茄红素的提取和测定179

实验6 大豆皂苷的提取和测定180

实验7 阿魏酸的提取和测定181

第八模块 分子生物学基础实验技术184

8.1 植物基因组DNA和质粒DNA的提取及回收184

实验1 SDS（十二烷基硫酸钠）法提取植物基因组DNA184

实验2 CTAB（十六烷基三乙基溴化铵）法提取植物总DNA185

实验3 碱裂解法提取质粒DNA187

实验4 煮沸法提取质粒DNA189

实验5 低熔点琼脂糖法回收DNA191

实验6 透析袋法回收DNA192

8.2 RNA的提取及其鉴定193

实验1 植物总RNA提取（Trizol法）及其电泳鉴定193

实验2 哺乳动物mRNA的制备和纯化195

实验3 RNA分子杂交（Northern blotting）196

8.3 基因扩增及扩增产物的检测198

实验1 PCR扩增基因及扩增产物的电泳检测198

实验2 水稻Actin基因的RT-PCR及电泳检测203

8.4 DNA重组、转化及原核表达205

实验1 大肠杆菌感受态细胞的制备及质粒DNA的转化205

实验2 禽流感病毒HA1基因原核表达载体的构建及在大肠杆菌中的诱导表达206

第九模块 设计性实验选题210

选题1 不同环境条件对水果维生素C含量的影响210

选题2 绿色植物色素的分离与鉴定211

选题3 卵磷脂的提取和鉴定212

选题4 壳聚糖的制备及性质鉴定212

选题5 食用真菌多糖的制备、纯化及性质鉴定213

选题6 细胞膜的制备及其成分（磷脂、胆固醇）分析214

选题7 植物凝集素的提取及生物学活性研究215

选题8 花生油是否掺杂棉子油的初步鉴定216

选题9 螺旋藻藻蓝蛋白的分离、纯化与鉴定216

选题10 奶粉中真实蛋白质含量测定方法研究217

选题11 血清白蛋白的分离、纯化与鉴定217

选题12 植物α-淀粉酶抑制剂的分离及活性研究218

选题13 血液乙酰胆碱酯酶的分离纯化及活力测定219

选题14 离子交换层析法纯化碱性磷酸酶219

选题15 猪胰糜蛋白酶的制备和纯度鉴定220

选题16 多酚氧化酶（PPO）的制备和活力测定221

选题17 溶菌酶的制备及其酶活力测定222

选题18 牛心线粒体分离、组分分离和酶学分析222

选题19 水稻某一基因的简单克隆分析223

选题20 猪胰岛素基因的原核表达载体的构建223

第十模块 实验论文撰写225

附录227

1 常用缓冲液的配制227

2 常用标准溶液的配制与标定233

3 常用酸碱指示剂237

4 市售酸碱试剂的浓度与比重237

主要参考文献239

参考网页地址241