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第一章 绪论1

第一节 组织培养的诞生与发展简史1

第二节 组织培养的优点、局限性及发展方向4

一、组织培养的优点4

二、组织培养的局限性5

三、组织培养的可能发展方向6

第三节 组织培养常用术语6

第四节 组织培养常用缩写词9

第二章 培养基12

第一节 培养基的基本性质12

一、营养成分12

二、促生长因子及激素12

三、渗透压13

四、pH13

五、无毒、无污染13

第二节 天然培养基13

一、血清13

二、鼠尾胶原16

三、组织浸出液17

第三节 合成培养基17

一、基本培养基17

二、无血清培养基22

三、无蛋白培养基和限定化学成分培养基24

第四节 其他培养用液24

一、平衡盐溶液24

二、消化液25

三、pH调整液25

四、抗生素液25

五、谷氨酰胺补充液26

第三章 细胞培养的基本条件27

第一节 细胞培养实验室的建立27

一、实验室设计原则与要求27

二、实验室的布局27

三、细胞培养实验室的基本设备29

第二节 培养仪器和材料31

一、常用仪器设备31

二、培养器皿与其他材料34

三、培养器皿的清洗和消毒35

第三节 培养用液41

一、培养基41

二、其他培养用液52

三、培养用液的灭菌与保存54

第四章 细胞培养的基本技术58

显微镜观察和流式细胞术58

一、相差显微镜58

二、荧光显微镜60

三、激光共聚焦扫描显微镜62

四、流式细胞仪65

第五章 体外培养的基本组织69

第一节 上皮组织69

一、内皮细胞的培养69

二、单层柱状上皮细胞的培养75

三、假复层纤毛柱状上皮细胞的培养76

四、复层扁平上皮细胞的培养78

第二节 结缔组织81

一、成纤维细胞的培养81

二、巨噬细胞的培养82

三、脂肪细胞的培养84

四、肥大细胞的培养86

五、血细胞的培养88

六、淋巴细胞的培养90

七、软骨细胞的培养91

八、骨细胞的培养93

第三节 肌组织94

一、心肌细胞的培养94

二、平滑肌细胞的培养95

三、骨骼肌细胞的培养97

第四节 神经组织98

一、神经元的培养98

二、神经胶质细胞的培养99

第五节 细胞运动的观察102

一、噬动轨迹法102

二、细胞刮除法103

三、细胞培养池法103

四、数字影像法104

第六节 细胞培养的生长测定104

一、细胞计数法104

二、台盼蓝染色法105

三、MTT比色法106

四、细胞生长曲线法106

五、［3H］-TdR掺入法107

六、BrdU掺入法108

第七节 细胞的冻存、复苏和运输109

一、细胞的冻存109

二、细胞的复苏110

三、细胞的运输110

第六章 细胞建系和鉴定112

第一节 正常细胞系的建立和鉴定112

一、正常细胞系建立程序113

二、正常细胞系建立的例证117

三、正常细胞系的鉴定119

第二节 癌细胞系、转化细胞系的建立和鉴定124

一、癌细胞系的建立124

二、癌细胞建系的例证126

三、转化细胞系建立127

四、癌细胞和转化细胞建系讨论和小结128

五、癌细胞系和转化细胞系的鉴定128

六、癌细胞和转化细胞系建立和鉴定的小结和讨论133

第七章 细胞周期分析与细胞克隆化技术135

第一节 细胞周期概述135

第二节 细胞周期调控136

第三节 细胞同步化方法138

一、使细胞同化在G0/G1期方法138

二、使细胞同步化在G1期139

三、使细胞同步化在G1/S期交界点140

四、使细胞同步化在有丝分裂期（M期）140

第四节 细胞周期分析141

一、流式细胞仪分析细胞周期141

二、［3H］-TdR掺入DNA法141

三、BrdU掺入法142

四、PCNA法142

五、Ki-67法142

六、测定细胞周期的其他方法142

第五节 细胞克隆的概念及培养方法144

一、细胞克隆的基本概念144

二、细胞克隆的培养方法145

第八章 器官培养147

第一节 器官培养的要求147

一、器官培养的取材148

二、培养基148

三、培养环境中的气体149

四、培养器官的支持物149

第二节 器官培养技术的特点149

一、优点149

二、不足150

第三节 器官培养的方法150

一、固体培养基器官培养法150

二、液体培养基器官培养法152

三、动态器官培养法155

四、体内器官培养法157

第四节 器官培养的应用159

一、器官培养在胚胎发育研究中的应用159

二、器官培养在器官功能及其代谢研究中的应用163

三、器官培养在肿瘤侵袭研究中的应用167

第九章 干细胞的培养171

第一节 胚胎干细胞171

一、胚胎干细胞的培养172

二、胚胎干细胞的形态特征及其鉴定177

第二节 神经干细胞178

一、神经干细胞的概念及生物学特征178

二、神经干细胞的分离与培养179

第三节 造血干细胞182

一、造血干细胞的定义及生物学特征182

二、造血干细胞的分离及培养182

第四节 间充质干细胞184

一、从骨髓细胞中分离MSC细胞184

二、流式细胞仪分离鉴定MSC184

三、MSCs克隆形成试验185

四、人的MSC细胞系培养185

五、MSC细胞向脂肪细胞谱系分化185

六、MSC诱导分化为软骨细胞——软骨细胞团试验186

七、MSC诱导分化为成骨细胞谱系186

第五节 表皮组织干细胞187

一、移植人皮肤培养表皮干细胞188

二、角质形成细胞的鉴定188

第六节 胰岛干细胞189

一、从人胰腺制备胰岛干细胞189

二、从小鼠胚胎干细胞系定向诱导分化为胰岛干细胞190

第七节 鉴定干细胞及分化细胞类型的标志191

第八节 体细胞重编程为多能干细胞194

一、细胞培养195

二、质粒构建195

三、慢病毒制备及感染196

四、4种转录因子的反转录病毒感染人成纤维细胞诱导产生iPS细胞196

五、人iPS细胞的鉴定196

第十章 细胞培养在细胞分化研究中的应用201

第一节 细胞分化概念201

一、细胞分化的特征201

二、细胞分化的调控202

三、细胞分化的分子机制203

四、细胞分化的调控障碍与疾病204

第二节 正常细胞的分化研究205

一、正常细胞分化研究简况205

二、ES和EG细胞培养和建系的基本技术206

三、ES细胞体外诱导分化209

四、诱导分化细胞的永生化212

五、小鼠骨髓和脾来源树突状细胞的分离与扩增培养213

第三节 癌细胞分化研究215

一、癌细胞分化研究的简况215

二、癌细胞分化研究215

三、癌细胞分化研究几种常用的检测技术222

第十一章 细胞培养在细胞衰老、凋亡研究中的应用225

第一节 细胞凋亡的常用研究方法225

一、细胞凋亡的形态学研究方法225

二、细胞凋亡的生物化学研究方法228

三、细胞凋亡的免疫化学分析方法231

四、细胞凋亡的分子生物学研究方法233

五、细胞凋亡时Ca2＋浓度测定236

第二节 抗凋亡研究237

一、bcl-2基因的抗凋亡作用237

二、细胞抗凋亡的信号转导通路238

第三节 细胞衰老的常用研究方法239

一、衰老相关β-半乳糖苷酶活性检测239

二、端粒长度的测定240

三、错配修复基因的测定241

四、微卫星不稳定性的测定242

第十二章 细胞融合与单克隆抗体制备244

第一节 单克隆抗体制备的基本原理245

第二节 小鼠-小鼠B淋巴细胞杂交瘤247

一、融合用细胞的制备247

二、细胞融合250

三、杂交瘤细胞的选择培养251

四、特异抗体的检测252

五、杂交瘤细胞的克隆化254

六、杂交瘤细胞的冻存255

七、单克隆抗体的大量制备256

八、单克隆抗体Ig类型的鉴定256

九、小鼠单克隆抗体的纯化257

第三节 人-人淋巴细胞杂交瘤与人-鼠杂交瘤细胞259

一、人-人淋巴细胞杂交瘤技术259

二、人-小鼠B淋巴细胞杂交瘤技术261

第四节 大鼠-大鼠B淋巴细胞杂交瘤261

一、大鼠骨髓瘤细胞系261

二、大鼠B淋巴细胞的制备261

三、细胞融合262

四、大鼠单克隆抗体的生产262

五、大鼠单克隆抗体的提纯262

第五节 基因工程抗体262

一、人-鼠嵌合抗体262

二、小分子抗体263

三、双特异性抗体263

四、噬菌体抗体264

第十三章 细胞培养的应用267

第一节 细胞培养在分子生物学中的应用267

一、分离提取研究267

二、基因导入272

三、原位检测研究277

第二节 细胞培养在生物工程中的应用279

一、大规模细胞培养的体系参数280

二、大规模细胞培养的工艺类型280

三、大规模细胞培养方法281

第三节 细胞培养在生物制品中的应用284

一、生物制品的概念284

二、细胞培养在疫苗制备中的应用284

第四节 细胞培养在药物开发中的应用286

第五节 细胞培养在临床中的应用293

一、细胞培养在临床诊断中的应用293

二、细胞培养在临床治疗中的应用295

第十四章 细胞毒性301

第一节 存活率302

一、染料排斥法测定细胞存活率302

二、染料摄取法测定细胞存活率302

三、中性红摄取法303

第二节 生存力303

第三节 代谢性细胞毒测定305

第四节 转化和诱变307

第五节 刺激性309

第十五章 细胞培养常见问题解答311

第一节 细胞培养相关问题311

一、细胞培养开始前的准备工作311

二、所需细胞从何处引进／订购311

三、如何准备细胞培养的用品311

第二节 细胞培养液使用相关问题312

一、细胞培养时应使用哪种培养基312

二、液体培养基的保存应该冷藏还是冷冻312

三、细胞培养液中是否需要添加谷氨酰胺312

四、培养用液pH对细胞生长有什么影响312

五、为什么培养液pH变化太快312

六、培养液出现沉淀时pH是否会发生变化313

七、培养细胞所用培养液需要的渗透压313

八、培养基在使用过程中应注意的问题313

九、为什么MEM需加NEAA313

十、为什么有的细胞需要丙酮酸钠？如何向培养液中添加314

十一、为什么有的细胞需要添加胰岛素314

十二、培养液中可以使用HEPES吗314

十三、培养液为何需避光保存314

十四、有没有培养液培养时不需要CO2孵箱314

十五、抗生素的使用方法314

第三节 细胞培养血清使用常见问题314

一、血清的级别314

二、血清的最佳化冻方式315

三、血清化冻后为什么是浑浊的315

四、胎牛血清的替代品315

五、血清为何要灭活315

六、血清灭活的正确方法315

第四节 细胞传代常见问题315

一、培养细胞何时需传代？多长时间传一次315

二、单层贴壁细胞如何传代316

三、细胞传代消化时所用胰蛋白酶浓度越高越好吗316

四、传代后培养细胞不贴壁的原因316

五、悬浮培养细胞如何传代316

六、悬浮培养细胞如何换液316

七、悬浮细胞为什么成团316

八、原代细胞培养物污染的原因317

九、培养细胞生长减慢的原因317

十、培养细胞死亡的原因317

十一、如何将单层贴壁生长细胞驯化为悬浮培养细胞317

十二、细胞培养适用的CO2浓度318

十三、实验室没有现成的细胞所需培养基，是否可以换为另一种培养基318

第五节 细胞及培养液质量检测相关问题318

一、为什么有些细胞没有传代数318

二、细胞培养应检测的微生物318

三、如何筛查支原体污染318

四、支原体污染的细胞能否去除支原体318

第六节 细胞冻存复苏相关问题319

一、没有程序冻存仪的情况下如何保证最优冷冻速度319

二、在液氮中冻存细胞能保存多久319

附录Ⅰ 实验室常用的细胞系（株）320

附录Ⅱ-1 常用缓冲液322

附录Ⅱ-2 其他缓冲液的配制323

附录Ⅲ 常用人工合成细胞培养基325

附录Ⅳ 细胞培养常用英语词汇326

英中文对照索引333